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        液相色譜操作過程常被忽略的故障問題

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        液相色譜操作過程常被忽略的故障問題

        發布日期:2023-07-07 作者: 點擊:

          液相色譜操作過程常被忽略的故障問題
          01【流動相未過濾】
          因為灰塵或任何其他雜質顆粒會磨損柱塞、密封圈、圓筒和止回閥,所以流動相中的任何固體顆粒都應預先除去。流動相Z好在玻璃容器中蒸餾,常用的方法是過濾??梢允褂梦⒖诪V膜(0.2μm或0.45μm)等過濾器。泵的入口應連接一根濾砂器棒(或片)。輸液泵的過濾器應經常清洗或更換。
          02【泵使用后未及時清洗】
          流動相不應含有任何腐蝕性物質,含有緩沖液的流動相不應留在泵中,尤其是如果泵停止過夜或更長時間。如果含有緩沖溶液的流動相留在泵中,由于蒸發或泄漏,甚至僅僅是因為溶液靜置,鹽的細晶體可能沉淀,這將損壞密封圈和柱塞以及上述固體顆粒。因此,需要泵入純水對泵進行充分清洗,然后更換為適合色譜柱保存和泵維護的溶劑(反相鍵合硅膠固定相為甲醇或甲醇-水)。
          03【流動相清空】
          泵工作時,要注意防止溶劑瓶中的流動相被用完,否則空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封圈,Z終產生泄漏。
          沒有流動相流出,沒有壓力指示怎么辦?
          泵里可能有很多氣體。此時可以打開泄壓閥,使泵以大流量(如5ml/min)運行,將氣泡排出。一個50毫升的注射器也可以用來幫助泵出口的氣體。另一個可能的原因是密封圈磨損,需要更換。
          04【壓力和流量不穩定】
          原因可能是泡沫,需要消除;或者單向閥內有異物,可將單向閥取出,浸入丙酮中進行超聲波清洗。有時濾砂桿中可能有氣泡,也可能被細小的鹽?;蛭⑸锊糠侄氯?。此時可將砂濾棒取出,浸入流動相中進行超聲除泡,也可將砂濾棒浸入稀酸(如4mol/L硝酸)中快速去除微生物,也可將鹽溶解后立即清洗。

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          為什么壓力過高或過低?
          可能是管道堵塞了,需要清洗清理。壓力下降的原因可能是管道泄漏。逐段檢查堵塞或泄漏情況。
          進行梯度洗脫時,多種溶劑混合,成分不斷變化,帶來一些特殊問題,須引起充分重視。
          PS:梯度洗脫法用于液相色譜中成分復雜的樣品。在同一分析周期內,流動相的濃度比按照一定的程序不斷變化,稱為梯度洗脫。因此,一個復雜樣品中不同性質的組分,按照各自合適的容量因子k,可以達到很好的分離目的。
          梯度洗脫的優點是:1??s短分析周期;2.提高分離能力;3.峰形得到改善,幾乎沒有拖尾;4.增加靈敏度。但有時會導致基線漂移。
          05【梯度洗脫流動相選擇不當】
          要注意溶劑的互溶性,不互溶的溶劑不能作為流動相進行梯度洗脫。有些溶劑在一定比例下是互溶的,但超出范圍后就不互溶了,使用時要注意。當有機溶劑和緩沖劑混合時,鹽晶體也可能沉淀,尤其是當使用磷酸鹽時。
          06【忽略空白梯度洗脫】
          梯度洗脫中使用的溶劑純度較高,以確保良好的重現性。樣品分析前須進行空白梯度洗脫,以識別溶劑的雜質峰,因為弱溶劑中的雜質在色譜柱頭部富集后會被強溶劑洗脫。用于梯度洗脫的溶劑需要完全脫氣,以防止在混合過程中形成氣泡。
          07【溶劑混合引起的粘度變化】
          混合溶劑的粘度往往隨組成而變化,因此梯度洗脫時壓力往往會發生變化。比如甲醇和水的粘度小,當兩者以相近的比例混合時,粘度增加很多。此時,柱壓約為流動相甲醇或水的兩倍。因此,應注意防止梯度洗脫時的壓力超過輸液泵或色譜柱所能承受的Z大壓力。
          08【六通閥的正確使用和維護】
          (1)進樣前須用0.45μm濾膜過濾樣品溶液,以減少顆粒對進樣閥的磨損。
          (2)旋轉閥芯時,不能太慢,更不能停留在中間位置,否則會堵塞流相,使泵內壓力急劇升高,甚至超過泵的Z大壓力;再次前往注射位置時,過高的壓力會損壞柱頭。
         ?、蹫榉乐咕彌_鹽和樣品殘留在進樣閥中,每次分析后都應沖洗進樣閥。通??梢杂盟?,也可以先用能溶解樣品的溶劑洗,再用水洗。
          09【色譜柱的使用和維護】
          色譜柱的正確使用和維護非常重要。稍有不慎就會降低色譜柱效率,縮短使用壽命,甚至損壞色譜柱。在色譜操作過程中,為了維護色譜柱,需要注意以下問題。
          10【調節流速過快】
          避免壓力和溫度的急劇變化以及任何機械振動。溫度的突然變化或色譜柱從高處墜落會影響柱內的填充情況;柱壓突然升高或降低也會對柱內填料產生沖擊,所以流速要慢慢調節,進樣時閥門的旋轉不能太慢(如上所述)。
          11[反沖柱]
          一般來說,色譜柱是不能反洗的,只有在生產商表示可以反洗的情況下,才可以通過反洗將殘留在柱頭上的雜質去除。否則反洗會迅速降低柱效。
          12【預制柱和保護柱】
          選擇合適的流動相(尤其是pH值)以避免固定相的破壞。有時預柱可以連接在取樣器的前面。當分析柱為鍵合硅膠時,預柱為硅膠,這樣流動相在進入分析柱前可以被硅膠提前“飽和”,可以防止分析柱中的硅膠基質被溶解。
          為了避免將具有復雜基質的樣品,尤其是生物樣品直接注入色譜柱,需要對樣品進行預處理,或者在進樣器和色譜柱之間連接保護柱。保護柱通常是填充類似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經常更換。

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        關鍵詞:加壓電泳液相色譜,重慶實驗室儀器,重慶實驗室設備

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